Técnicas Microbiológicas

Por: Laura Nelly Quirino Diego

Submodulo II - Práctica No. 2

Objetivo: Observar e identificatar la morfologaía de algunos hongos por medio de una tinción simple.

Introducción:

Morfología de Hongos y Tinción Simple

Los hongos que producen micosis en el ser humano se encuentran en dos estados morfólogicos básicos: mohos y levaduras.

MOHOS: Hongo multicelular. Su estructura filamentosa se desarrolla a través del crecimiento continuo de una propágula. El elemento tubular que emerge se denomina "hifa". El conjunto y las distintas ramificaciones de las hifas se denomina "micelio" o "thallus". Las "hifas" pueden introducirse en el sustrato formando un micelio vegetativo o proyectarse hacia el exterior constituyendo el micelio aéreo, que es el que define aspecto y morfología de la colonia, pudiendo ser: algodonoso, plumoso, lanudo, velloso, sedoso, brillante, mate, arrugado, plegado, plano, acuminado, extendido, desparramado, circunscrito, membranoso, cerebriforme, pigmentado o no, etc... En este micelio se producen elementos de propagación o propágulas que pueden ser: esporas, conidios, fragmentos de micelio, esclerocio, etc... Existe un grupo que merece destacarse por su frecuencia y tipo de patología, los Dermatofitos. Estos poseen enzimas proteolíticos capaces de digerir la queratina de la que se alimentan, por tanto van a localizarse en zonas muy superficiales como la piel, uña y pelos produciendo micosis superficiales llamadas Dermatofitosis o "Tiñas" (tineas). Los más representativos son Epidermophyton, Microsporum y Trichophyton.

LEVADURAS: Hongo unicelular, redondo o elipsoidal que se reproduce por gemación o fisión binaria. La gemación es la protrusión externa de parte del protoplasma materno (gema o yema), que va creciendo progresivamente, hasta que se desprende produciendo un nuevo individuo. Cada uno de estos elementos se denomina blastosporo y a este tipo de división blastospórica. La célula progenitora queda con las cicatrices de las distintas gemaciones. Es frecuente que exista el fenómeno del "dimorfismo". Esto es, que una levadura forma parte de la evolución morfológica de un hongo filamentoso y al revés. Una levadura que fuese capaz de producir hifas, sería un hongo dimórfico. Las colonias que crecen en un sustrato pueden ser cremosas o mucoides, lisas o plegadas, limitadas circulares, blancas o rojas.El prototipo es la Candida y a diferencia de los anteriores son mas agresivas y difunden mejor por lo que pueden localizarse en partes mas profundas, como las mucosas. Producen las micosis intermedias o candidiasis.

Tinción Simple
Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol).
El Hidróxido de potasio al 10% (solución de KOH) permite ver elementos de hongos ya que el KOH digiere parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de la célula huésped, pero no actúa sobre los polisacáridos de las paredes celulares de los hongos.
La tinta china o Nigrosina permite observar células levaduriformes capsuladas (Cryptococcus), sobre todo en LCR. Los polisacáridos capsulares rechazan la tinta china y la cápsula aparece como un halo claro alrededor de los microorganismos. Azul de metileno de Loeffler puede agregarse a las preparaciones en fresco de heces para observar la presencia de leucocitos.

Materiales:

• 3 portaobjetos y 3 cubreobjetos
  
• Microscopio


• Asa inocular
  
• Mechero bunsen


• Pizeta


• Muestras de materia orgánica en descomposición
  

Reactivos:

• Violeta de genciana


• Azul de metileno


• Fucsina finicada
  
  

Procedimiento:

1. Se esteriliza el asa inocular a la flama del mechero hasta que se encuentre al rojo vivo.


2. Una vez enfriada el asa, se hace la recolección del hongo de las repesctivas muestras de alimentos en descomposición.


3. Se fija en el cubreobjetos con un gota de agua, la cual despues es secada cerca de la flama del mechero cuidando que no entre en contacto directo con esta y no aumente su temperatura más de lo necesario.


4. Se coloca una gota de indicador a la muestra y se observa al microscopio.


5. Repetir el procedimiento con los demás hongos.
   
   

Observaciones:

• Con la ayuda del microscopio se pudo observar la morfología filamentosa de los hongos, con el colorante correspondiente:

- Hongo de hoja de tomate (Violeta de genciana)

- Hongo de chile (Fucsina finicada)

- Hongo de jitomate (Azul de metileno)

Fuentes de Información

http://www.canesten.bayer.es/curso/micolo_21.htm